Western Blot Labor-Kompaktkurs

Inhalte & Lernziele

Einzelkomponenten eines komplexen Proteingemisches können durch Antikörper spezifisch und hochempfindlich nachgewiesen werden. Bei der Trennung der Proteine mittels Polyacrylamid-Gelelektrophorese sind die Proteine jedoch in einer Gelmatrix und somit für die großen Antikörpermoleküle unzugänglich. Daher werden die Proteine aus dem Gel auf eine dünne Membran übertragen (Western Blot). Es entsteht ein Abdruck des Proteinmusters auf der Membran und spezifische Antikörper können darauf ungehindert an gesuchte Proteine binden. Der Nachweis des zu detektierenden Proteins erfolgt durch eine Farbreaktion oder Chemilumineszenz-Reaktion. Dieser Kurs vermittelt Ihnen die Technik des Western Blots und zeigt Vor- und Nachteile der verschiedenen Arten des Immunoblottings sowie unterschiedlicher Detektionsverfahren auf.

Im theoretischen Teil werden folgende Themen behandelt:

Grundlagen der Proteinanalytik und der Blot-Technik
Proteinextraktion und quantitative Bestimmung
Protein-Separationsverfahren
Basiswissen über Antikörper
Verschiedene Detektionsverfahren für den Western Blot (ECL, AP, Phospho-Imager)
Trouble shooting

Der Praxisteil umfasst die vollständige Durchführung eines Western Blots:

Proteinextraktion und quantitative Proteinbestimmung
Probenvorbereitung
SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese
Tank und semidry blotting
Antigendetektion mittels Antikörpern und colorimetrischer Farbreaktion (alkalische Phosphatase)
Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit soliden Grundkenntnissen in der Molekularbiologie.