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DNA-Absorptionsmessung mit dem STS-UV-Mikrospektrometer

Quantifizierung von DNA über einen großen Konzentrationsbereich

Yvette Mattley, PhD

Abbildung 1: Absorptionsmessungen von DNA-Lösungen mit dem STS-UV bei niedrigen Konzentrationen (0,15 bis 2,5 µg/mL)

Abbildung 2: OD260 von in Wasser suspendierter DNA im Konzentrationsbereich von 0,15 bis 2,5 µg/mL

Abbildung 3: OD260 von in Wasser suspendierter DNA im Konzentrationsbereich von 0,15 bis 110 µg/mL

Abbildung 4: OD260 von in Wasser suspendierter DNA im Konzentrationsbereich von 0,15 bis 150 µg/mL

Die Konzentration und Reinheit von Biomolekülen in Proben wird üblicherweise über die UV-Absorption bzw. -Extinktion ermittelt. Mit einem Wellenlängenbereich von 190 bis 650 nm und einer optischen Auflösung von ca. 1,5 nm ist das STS-UV-Mikrospektrometer ideal für solche Messungen. Das STS-UV ist ein kompaktes, leistungsstarkes Mikrospektrometer, das qualitativ hochwertige UV-Absorptionsdaten über einen weiten Bereich von Konzentrationen liefert. Dieser Applikationsbericht veranschaulicht die enorme Leistungsfähigkeit des Geräts für Extinktionsmessungen von DNA-Proben im Konzentrationsbereich von 0,15 bis 150 µg/mL.

Typischerweise weisen Proben für Konzentrationsmessungen von in Lösung suspendierter DNA sehr hohe oder sehr niedrige, an den Extremen liegende Konzentrationen auf. Während konzentrierte DNA-Proben verdünnt werden können, stellen Proben mit niedrigen Konzentrationen eine Herausforderung dar. Ohne den Vorteil eines Spektrometers mit einstellbarer Schichtdicke bzw. Wegstrecke oder eines Samplers für geringe Volumina muss die Schichtdicke der Küvette selbst eingestellt werden, um Messungen über einen breiten Konzentrationsbereich zu ermöglichen. Der große Dynamikbereich und das hohe Signal-Rausch-Verhältnis des STS-UV ermöglichen DNA-Messungen über einen breiten Konzentrationsbereich ohne die Schichtdicke anzupassen, für Absorptionsniveaus von 0,005 bis über 1,5 Extinktionseinheiten (AU).

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